Coloration de Gram

Définition

La colo­ra­tion de Gram est une tech­nique de base en micro­bio­lo­gie et micro­sco­pie optique. Elle per­met de dif­fé­ren­cier deux groupes de bac­té­ries en fonc­tion de la com­po­si­tion de leur paroi. Les bac­té­ries colo­rées en rose sont dites à colo­ra­tion de Gram néga­tive tan­dis que celles en vio­let sont à colo­ra­tion de Gram posi­tive. Cette méthode de colo­ra­tion est uti­li­sée notam­ment pour orien­ter l’i­den­ti­fi­ca­tion bactérienne.

Schéma des différentes étapes de la coloration de Gram et coloration des bactéries.
Schéma des dif­fé­rentes étapes de la colo­ra­tion de Gram et colo­ra­tion des bac­té­ries. Les bac­té­ries à paroi Gram posi­tive et néga­tive sont colo­rées en vio­let et en rose respectivement.

Principe de la coloration de Gram

La colo­ra­tion de Gram com­mence par l’u­ti­li­sa­tion du cris­tal vio­let, un colo­rant pri­maire, qui colore toutes les bac­té­ries en vio­let. Ce colo­rant se fixe au niveau de la paroi (pep­ti­do­gly­cane) des bac­té­ries. Ensuite, du lugol, un agent mor­dant, est ajou­té pour sta­bi­li­ser le cris­tal vio­let et évi­ter qu’il s’échappe trop faci­le­ment de la paroi bactérienne.

Puis de l’alcool est ajou­té ce qui per­met d’éliminer le colo­rant chez une par­tie de cel­lules : les bac­té­ries à paroi Gram néga­tive. En effet, ces bac­té­ries dis­posent d’une mince couche de pep­ti­do­gly­cane et vont rede­ve­nir inco­lores lorsque le colo­rant sera déta­ché par l’al­cool. Au contraire, les bac­té­ries à paroi Gram posi­tive res­tent colo­rées par le cris­tal vio­let car elles pos­sèdent une couche de pep­ti­do­gly­cane plus épaisse.

À cette étape, les bac­té­ries sont soient colo­rées en vio­let soit inco­lore. Pour pou­voir les dif­fé­ren­cier, un second colo­rant, la fuschine, est ajou­té et colore toutes les bac­té­ries en rose. Il est visible chez les bac­té­ries à paroi Gram néga­tives qui étaient rede­ve­nues trans­pa­rentes. Par contre, chez les bac­té­ries à paroi Gram posi­tive, la pré­sence du cris­tal vio­let qui est plus fon­cé masque la colo­ra­tion de la fuschine. Ces bac­té­ries res­tent donc violettes.

Objectifs de la coloration de Gram

La colo­ra­tion de Gram per­met de :

- visua­li­ser la mor­pho­lo­gie et le mode de grou­pe­ment d’une souche

- véri­fier la pure­té d’une souche

Références bibliographiques

Moyes, R. B., Reynolds, J., & Breakwell, D. P. (2009). Differential stai­ning of bac­te­ria : Gram stain. Current Protocols in Microbiology. 15 : A.3C.1‑A.3C.8 doi:10.1002/9780471729259.mca03cs15 (lien)

Popescu, A., & Doyle, R. J. (1996). The Gram stain after more than a cen­tu­ry. Biotechnic & Histochemistry, 71(3), 145–151. doi:10.3109/10520299609117151 (lien)