Coloration de Gram
Définition
La coloration de Gram est une technique de base en microbiologie et microscopie optique. Elle permet de différencier deux groupes de bactéries en fonction de la composition de leur paroi. Les bactéries colorées en rose sont dites à coloration de Gram négative tandis que celles en violet sont à coloration de Gram positive. Cette méthode de coloration est utilisée notamment pour orienter l’identification bactérienne.
Principe de la coloration de Gram
La coloration de Gram commence par l’utilisation du cristal violet, un colorant primaire, qui colore toutes les bactéries en violet. Ce colorant se fixe au niveau de la paroi (peptidoglycane) des bactéries. Ensuite, du lugol, un agent mordant, est ajouté pour stabiliser le cristal violet et éviter qu’il s’échappe trop facilement de la paroi bactérienne.
Puis de l’alcool est ajouté ce qui permet d’éliminer le colorant chez une partie de cellules : les bactéries à paroi Gram négative. En effet, ces bactéries disposent d’une mince couche de peptidoglycane et vont redevenir incolores lorsque le colorant sera détaché par l’alcool. Au contraire, les bactéries à paroi Gram positive restent colorées par le cristal violet car elles possèdent une couche de peptidoglycane plus épaisse.
À cette étape, les bactéries sont soient colorées en violet soit incolore. Pour pouvoir les différencier, un second colorant, la fuschine, est ajouté et colore toutes les bactéries en rose. Il est visible chez les bactéries à paroi Gram négatives qui étaient redevenues transparentes. Par contre, chez les bactéries à paroi Gram positive, la présence du cristal violet qui est plus foncé masque la coloration de la fuschine. Ces bactéries restent donc violettes.
Objectifs de la coloration de Gram
La coloration de Gram permet de :
– visualiser la morphologie et le mode de groupement d’une souche
– vérifier la pureté d’une souche
Références bibliographiques
Moyes, R. B., Reynolds, J., & Breakwell, D. P. (2009). Differential staining of bacteria: Gram stain. Current Protocols in Microbiology. 15: A.3C.1-A.3C.8 doi:10.1002/9780471729259.mca03cs15 (lien)
Popescu, A., & Doyle, R. J. (1996). The Gram stain after more than a century. Biotechnic & Histochemistry, 71(3), 145–151. doi:10.3109/10520299609117151 (lien)